Количественный анализ пцр

Содержание
  1. Пцр на гепатит c: количественный и качественный анализ, расшифровка результатов
  2. Виды ПЦР
  3. Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
  4. Расшифровка результатов ПЦР-исследования
  5. Преимущества ПЦР-анализа
  6. Недостатки ПЦР
  7. Цена ПЦР-анализа на гепатит С
  8. Количественная ПЦР: суть анализа и расшифровка результатов
  9. Описание
  10. Суть анализа
  11. Способ проведения
  12. Сдача на ПЦР биоматериала
  13. Количественная оценка полученных результатов
  14. Что обнаруживается?
  15. Особенности
  16. Стоимость ПЦР-диагностики
  17. Анализы методом ПЦР
  18. Основы ПЦР
  19. Пцр в диагностике инфекционных болезней
  20. ПЦР-диагностика гепатитов
  21. Пцр в диагностике вич-инфекции
  22. Где сдать анализы ПЦР?
  23. Типы ПЦР анализа
  24. Качественный ПЦР на гепатит С
  25. Пцр количественный на гепатит с
  26. Пцр количественный
  27. Когда необходим количественный ПЦР анализ
  28. Пцр на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду
  29. Мазок Пцр количественный на хламидии
  30. Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип
  31. Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения
  32. Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам
  33. Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови
  34. Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови
  35. К какому врачу обратиться для пцр анализа

Пцр на гепатит c: количественный и качественный анализ, расшифровка результатов

Количественный анализ пцр

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл.

При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл.

Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн.

МЕ, то результат выглядит следующим образом – 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель – число копий на 1 мл крови (1 МЕ – это 4 копии РНК).

Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Рекомендуемые товары

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

  • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
  • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
  • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
  • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
  • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
  • У пациента диагностирован цирроз.
  • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Качественный анализ. Расшифровка

ОбнаруженоПациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаруженоПациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаруженоЧеловек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*102 МЕ/млКонцентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*105 МЕ/млНизкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*105 МЕ/млВысокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*107 МЕ/млПоскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Генотипирование. Расшифровка

Обнаружена РНК определенного генотипаВ биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита СВ биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаруженоЧеловек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

  1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
  2. Загрязнение образца крови.
  3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
  4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса.

ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины).

С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа – низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области – от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В – от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Источник: https://GepatitOf.ru/articles/ptsr-na-gepatit-c/

Количественная ПЦР: суть анализа и расшифровка результатов

Количественный анализ пцр

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Описание

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Суть анализа

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови.

При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя.

Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами.

Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме.

При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Сдача на ПЦР биоматериала

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

Количественная оценка полученных результатов

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии.

Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С).

При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР.

Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С).

Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР).

После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые.

Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Что обнаруживается?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Особенности

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

Стоимость ПЦР-диагностики

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

Источник: https://FB.ru/article/422053/kolichestvennaya-ptsr-sut-analiza-i-rasshifrovka-rezultatov

Анализы методом ПЦР

Количественный анализ пцр

Полимеразную цепную реакцию (Polymerase chain reaction, ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году американский биохимик Кэри Б. Мюллис. В 1993 году за это открытие он был удостоен Нобелевской премии.

Сегодня области применения ПЦР как современного метода молекулярной биологии чрезвычайно широки. Особое место диагностика ПЦР занимает в медицинской практике. И причина этому достаточно проста: полимеразная цепная реакция делает невозможное возможным.

Часто диагностику ПЦР образно описывают как метод, с помощью которого можно находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. “Иглой” является крошечный фрагмент генетического материала клеток (ДНК или РНК).

Таким образом, открытие этого метода – одно из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние десятилетия. Развитие метода ПЦР позволило медицинской диагностике в целом подняться на качественно новый уровень.

Основы ПЦР

Основа метода – многократное избирательное копирование (амплификация) определённого участка ДНК с целью получения такого количества генетического материала, которого будет достаточно для визуальной детекции. При этом многократно копируется (амплифицируется) только заданный участок ДНК при условии, что он присутствует в исследуемом биоматериале.

Кроме того, исследование помимо простого увеличения количества копий участков ДНК позволяет проводить другие манипуляции с генетическим материалом. Поэтому метод широко применяется в научных исследованиях, биологической и медицинской практике: в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний, при выявлении мутаций, генотипировании, установлении отцовства, идентификация личности и др.

Пцр в диагностике инфекционных болезней

Сегодня ПЦР-диагностика инфекций – один из самых точных, чувствительных и эффективных клинических лабораторных методов. Причём спектр выявляемых возбудителей практически неограничен – была бы разработана тест-система для ПЦР-анализа искомого возбудителя.

Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявить возбудителя даже при его минимальном содержании (то есть в исследуемом биоматериале присутствуют всего несколько молекул его ДНК).

ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний тогда, когда это невозможно сделать другими методами (иммунологическими, культуральными, микроскопическими).

Поэтому для целого ряда возбудителей инфекций метод полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом», он проверен временем и апробирован клинически. В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней ПЦР – самый чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения возбудителей.

Это позволяет не только установить этиологию заболевания, но и контролировать течение инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимого лечения.

Анализ на ИППП методом ПЦР особенно актуальны при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (Хламидия , качественное определение ДНК; Микоплазма, качественное определение ДНК; Возбудитель гонореи, качественное определение ДНК;  Возбудитель трихомоноза, качественное определение ДНК). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре.

Современная ПЦР-диагностика позволяет не только выявить генетический материал возбудителей инфекций, но и определить концентрации их ДНК/РНК (количественный формат исследования).

Определение количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если выявлены условно-патогенные микроорганизмы (Микоплазма, количественное определение ДНК; Типирование уреаплазмы, количественное определение ДНК) .

Одним из основных направлений развития метода ПЦР является разработанный в CMD формат «Мультипрайм», позволяющий выявить в одной пробирке (и одной реакции) нескольких патогенов.

ПЦР-диагностика гепатитов

В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это возбудители гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусами Эпштейна-Барр и простого герпеса.

Способность поражать печень таких агентов как вирусы ТТ и гепатита G сегодня признается не всеми.

Все эти вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.

Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов с выявлением конкретного возбудителя.

Без использования современных молекулярно-биологических методов это невозможно.

Поэтому диагностика гепатитов методом полимеразной цепной реакции – один из самых важнейших шагов в установлении причины заболевания и определения дальнейшей тактики лечения.

Пцр в диагностике вич-инфекции

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используется наиболее доступный и одновременно чувствительный подход – обнаружение в крови антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) – с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблоттинга (ИБ). Эффективность выявления лиц, инфицированных ВИЧ, с помощью данного подхода может достигать 99% и более.

Но серологическая диагностика ВИЧ-инфекции имеет ряд ограничений:

  1. Неэффективность в период т.н. «серологического окна» (в первые недели после заражения антитела не выявляются по причине их отсутствия или низкой концентрации).
  2. Антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
  3. Ложноположительные результаты ИФА из-за присутствия в крови антител к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ.
  4. Ложноотрицательные и сомнительные результаты ИФА и иммуноблоттинга (особенно у пациентов в терминальной стадии заболевания).

Поэтому анализы ПЦР при обследовании на ВИЧ-инфекцию сегодня находят всё более широкое применение. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ-инфекцию» (утв. Минздравсоцразвития РФ 06.08.

2007) «при наличии эпидемиологических критериев, свидетельствующих о недавнем риске заражения ВИЧ для пациентов и при этом предположительно ложноположительных или ложноотрицательных результатов в ИФА и ИБ, например, при обследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, или пациентов в периоде «серонегативного окна» используется метод ПЦР, при котором обнаруживается генный материал ВИЧ…..». А в случае уже установленного диагноза ВИЧ-инфекции анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии.

В Центре молекулярной диагностики (CMD) можно сдать ПЦР-анализ на ВИЧ анонимно.

Где сдать анализы ПЦР?

Для этого обращайтесь к разделу сайта «Где сдать анализы».

Источник: https://www.cmd-online.ru/analizy-i-tseny/polimeraznaja-cepnaja-reakcija-pcr/

Типы ПЦР анализа

Количественный анализ пцр

Полимеразная цепная реакция, сокращенно ПЦР.

Представляет собой метод, используемый для экспоненциальной амплификации определенной последовательности ДНК-мишени.

Позволяющей изолировать, секвенировать или клонировать одну РНК среди многих.

ПЦР была разработана более 30 лет назад, американским биохимиком Кэри Муллисом. 

Полимеразная реакция имеет широкое использование, применяется не только как анализ на ИППП.

Применение ПЦР практикуется в следующих направлениях: генотипирование:

  • клонирование
  • обнаружение мутаций
  • секвенирование
  • криминалистика
  • тестирование на отцовство

Как правило, ПЦР представляет собой трехступенчатую реакцию.

Образец, содержащий разбавленную концентрацию матричной ДНК, смешивают с термостабильной ДНК-полимеразой.

Такой как Taq-полимераза, праймер, дезоксинуклеотидтрифосфаты (dNTP) и магний. 

На первой стадии ПЦР образец нагревают до 95-98 градусов.

На втором этапе температуру снижают до приблизительно 55-65 градусов.

На третьей стадии температуру обычно повышают до 72 градусов.

Эта последовательность денатурации, отжига, и расширения повторяется для множества циклов.

Что и приводит к экспоненциальному усилению матричной ДНК.

ПЦР достаточно сложный, но информативный метод исследования.

Зачастую применяется в диагностике патологий вирусной и инфекционной этиологии.

Анализ позволят практически со 100% точностью выявить и определить разновидность патогенного микроорганизма.

В последнее время, полимеразная реакция приобрела популярность в ранней диагностике туберкулеза.

Позволяет выявить возбудителя с 98% точностью на доклинической стадии. 

Преимущества диагностики туберкулеза при помощи ПЦР:

  • Максимально высокая точность обнаружения присутствия в организме Mycobacterium tuberculosis, за счет использования специального фермента, предназначенного для возбудителя туберкулеза. 
  • Высокая чувствительность анализа, как следствие, исследование способно обнаружить присутствие даже одной бактерии. 
  • Быстрота получения результатов диагностики. Тестирование проводится достаточно быстро, уже спустя 3-5 часов можно получить готовые результаты. 

Mycobacterium tuberculosis является внутриклеточным микобактериальным патогеном.

Представляет собой одно из самых распространенных и наиболее серьезных инфекционных заболеваний в мире.

Считается, что более 2 миллиардов людей имеют скрытую инфекцию M. Tuberculosis.

Около 8 миллионов — активную форму туберкулеза.

Кроме того, пациенты с ВИЧ и нарушением работы иммунитета на фоне заболевания чаще подвержены дополнительному инфицированию бактерией M. tuberculosis.

В их случае патология протекает сложнее, с многочисленными осложнениями.

ПЦР при подозрении на туберкулез является наиболее востребованным и точным анализом.

Способен выявить заболевание на самых ранних сроках, а также прибегнуть к своевременному, эффективному лечению.

Качественный ПЦР на гепатит С

В большинстве случаев, качественный ПЦР назначается при выявлении в организме пациента антител к гепатиту С.

Полимеразная реакция при подозрении на гепатит С проводится по следующему принципу.

Первое тестирование — на четвертую неделю после обнаружения антител.

Второе — на двенадцатую неделю, третье — на двадцать четвертую.

Далее анализ назначается на постоянной основе, один раз каждые 12 месяцев. 

Проведение полимеразной реакции на гепатит Б, А, Ц позволяет получить максимально точные результаты за счет высокой чувствительности теста от 10 до 500 МЕ/мл.

Это дает возможность определять наиболее низкие показатели присутствия в организме вируса и контролировать его дальнейшее развитие. 

Расшифровка результатов проводится лечащим врачом.

Положительный анализ говорить о наличии патогенного микроорганизма.

Отрицательный — чаще об отсутствии, но на 100% не исключает НСV. 

Взятие анализа на проведение ПЦР НСV проводится в утреннее время, биологическим материалом является венозная кровь. 

Пцр количественный на гепатит с

Количественная полимеразная реакция назначается пациентам, уже имеющим диагноз «гепатит С».

Задача анализа выявить вирусную нагрузку на организм.

Определить количественное присутствие патогена, а также понять, насколько проводимая терапия эффективна.

Расшифровать результаты диагностического исследования поможет лечащей врач-гепатолог.

Источник: https://kvd-moskva.ru/tipy-pcr-analiza/

Пцр количественный

Количественный анализ пцр

ДНК ПЦР анализы направлены на выявление патогенных микроорганизмов. Они бывают количественные и качественные.

Если при ПЦР ДНК обнаружена или не выявлена, это качественный тест.

Если указывается ещё и концентрация, это количественная ПЦР. Данный анализ более информативен. Хотя требуется он далеко не всегда.

Когда необходим количественный ПЦР анализ

При ПЦР количественное определение требуется во многих случаях. Она дает дополнительные возможности, если сравнивать с качественным анализом.

Если после проведения ПЦР ДНК обнаружено, знать количество микроорганизмов необходимо, чтобы понять:

  • требуется ли пациенту лечение (при низких количественных показателях оно может не назначаться);
  • насколько быстро идет выздоровление (есть ли вирусологический ответ от лечения);
  • стоит ли продолжать терапию этими же препаратами или нужно менять схему;
  • болезнь находится под контролем или возникает рецидив, требующий дополнительных терапевтических мероприятий;
  • насколько высоким является риск осложнений (например, вероятность диспластических изменений в шейке матки при папилломавирусной инфекции).

Поговорим подробнее, при каких патологиях могут потребоваться количественные ДНК ПЦР анализы.

Пцр на микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллу, кандиду

Существуют микроорганизмы, которые не всегда вызывают патологический процесс в структурах урогенитального тракта. Они могут вызывать воспалительные или другие симптомы только в том случае, когда популяция бактерий значительно увеличится.

Чтобы узнать, увеличилась она или нет, требуются соответствующие анализы. Многие лаборатории предлагают комплексный количественный анализ ПЦР сразу на несколько возбудителей.

Микоплазмы двух видов могут вызывать воспалительные процессы во влагалище. Это микоплазма гениталиум и хоминис. Причем, гениталиум может вызывать воспаление даже в минимальных концентрациях.

Этот микроорганизм рассматривается как однозначно патогенный.  При его выявлении даже в малых количествах проводится лечение. Целью его считается эрадикация возбудителя.

Критерием успешности терапии является отрицательный анализ ПЦР на микоплазму гениталиум.

А вот хоминис – менее опасный вид данных микроорганизмов. Он может обнаруживаться в урогенитальном тракте многих людей. В том числе тех, кто не имеет признаков воспалительного процесса в урогенитальном тракте. В этом случае пороговой считается концентрация бактерий в клиническом материале от 104 копий ДНК в мл.

Если ПЦР покажет, что бактерий меньше, лечение может и не назначаться. Но если количество патогенов превышает указанное значение, требуется антибактериальная терапия.

Потому что в больших количествах микоплазмы:

  • вызывают воспаление;
  • могут провоцировать осложнения;
  • передаются при половом акте;
  • опасны для беременных.

Гарднереллы – вид транзитных микроорганизмов, которые часто выявляются в урогенитальном тракте женщин. Они не вызывают воспаления. Но в больших количествах провоцируют дисбактериоз. Это заболевание, основным проявлением которого является обильное отделяемое из влагалища с неприятным запахом.

Патология нарушает качество половой жизни. Гарднереллы в больших количествах способны быстро уничтожать лактобактерий. Они вытесняют их. В итоге может оказаться так, что лактобактерии вообще не обнаруживаются во влагалище. Этого не должно случиться, потому что молочнокислые бактерии защищают организм женщины от других микробов. Они делают это за счет продукции молочной кислоты.

Кислая рН влагалища не дает условно-патогенным бактериям чрезмерно развиваться.

Количественная ПЦР ДНК диагностика на гарднереллы показывает, сколько этих микроорганизмов содержится во влагалище. Если их больше 104 копий ДНК в мл, требуется антибактериальное лечение. Оно позволяет предотвратить дисбактериоз влагалища или устранить его основные проявления, если они уже присутствуют.

Кандиды – ещё одна группа микроорганизмов, для которых имеет значение количество. Это грибы, которые в норме присутствуют в урогенитальном тракте большинства людей.

Кандидоз является оппортунистической инфекцией. Он развивается, когда в организме ослаблен иммунитет. В этом случае количество кандид резко увеличивается. Появляются красные пятна, белые выделения и другие симптомы, иногда достаточно сильно выраженные.

Само по себе обнаружение кандиды с помощью ПЦР не дает врачу никакой ценной информации. Всем и так понятно, что эти грибы в структурах урогенитального тракта есть. Поэтому качественная ПЦР на кандидоз не проводится.

Клиническое значение имеет только количественный метод ПЦР. При определении кандид в количестве, превышающем пороговое значение, устанавливается диагноз кандидоз. Назначается соответствующее лечение.

Показанием для назначения количественного ПЦР на кандиды является в основном наличие симптомов кандидоза. Анализ также может быть использован в случае обнаружения псевдомицелия при микроскопии мазка из урогенитального тракта. ПЦР позволяет установить вид гриба.

Ведь кандидоз может быть вызван десятками видов микроорганизмов. Чаще всего это кандида альбиканс. Но есть ещё 5-6 видов грибов, которые провоцируют кандидоз достаточно часто. Причем, их наличие усложняет процесс лечения.

Часто такие кандидозы рецидивируют. Они плохо реагируют на традиционно используемые при кандидозе противогрибковые препараты.

Количественная ПЦР на кандидоз используется и после лечения. Она помогает врачу понять, была ли проведенная терапия успешной, и оценить риск рецидива грибкового заболевания в будущем.

Количественная ПЦР на уреаплазмоз тоже проводится достаточно часто. Уреаплазмы рассматриваются как условно-патогенная флора. То есть, они опасны только в больших количествах.

ПЦР количественная на уреаплазмы позволяет решить вопрос о необходимости лечения.

У многих врачей-венерологов целесообразность использования количественной ПЦР на уреаплазмы вызывает вопросы. Этот микроорганизм обладает очень высокой адгезивной способностью. Он крепко прилипает к клеткам, поэтому в клиническом материале может быть гораздо меньше бактерий, чем есть в организме.

Соответственно, количественные показатели могут быть заниженными. Кроме того, они значительно варьируют от анализа к анализу.

Хотя в настоящее время считается, что лечение стоит начинать только при концентрации бактерий от 104 копий ДНК в мл, нередко врачи назначают лечение и при меньшем их количестве. Особенно если женщина готовится к беременности.

Есть немало исследований, которые подтверждают: уреаплазма очень опасна для плода. Она вызывает инфицирование околоплодных оболочек.

Уреаплазма способна спровоцировать преждевременные роды. Она вызывает респираторные инфекции у новорожденного плода. Поэтому даже если качественная ПЦР показывает небольшие количества уреаплазм, желательно пролечиться тем женщинам, которые готовятся к беременности.

Не требуется лечение при сочетании таких факторов:

  • концентрация уреаплазм ниже пороговой;
  • нет симптомов воспаления;
  • супружеская пара не планирует беременность.

Тогда лечиться не обязательно. Но такие случаи встречаются редко. Потому что пациенты редко приходят на диагностику венерических заболеваний с профилактической целью. В основном они обращаются после возникновения воспалительных симптомов.

Мазок Пцр количественный на хламидии

На хламидии чаще проводят тест качественный, а не количественный.

Потому что этот микроорганизм является патогенным.

Одного только факта его обнаружения достаточно, чтобы начать лечение.

Причем, количество копий ДНК не играет существенной роли в определении схемы терапии и дозировок препаратов.

Тем не менее, количественные тесты иногда проводят.

Они дают врачу возможность оценить прогноз заболевания.

Понять, насколько высока вероятность осложнений.

А также спрогнозировать ответ на лечение.

При большой концентрации хламидий в урогенитальном тракте доктор может увеличить курс терапии.

Оценивая данный показатель в динамике, он может понять, работают ли те антибактериальные препараты, которые он назначил.

Количественный ПЦР анализ ВПЧ 21 тип

Такие исследования могут использоваться в диагностике папилломавирусной инфекции.

Почему нужны именно количественные анализы, а не качественные? Они более информативны в плане оценки прогноза заболевания, целесообразности противовирусного лечения и оценки его результативности.

Для первичной диагностики обычно проводят качественную ПЦР. Она помогает установить, какие типы ВПЧ присутствуют в организме. Это могут быть высокоонкогенные, среднеонкогенные или низкоонкогенные типы.

Особую настороженность вызывают вирусы высокой онкогенности. Поэтому не лишним будет знать, в каком количестве они содержатся в урогенитальном тракте.

Особенно важен данный анализ для женщин. Ведь у них ВПЧ является основной причиной рака шейки матки.

В свою очередь карцинома шейки матки – самое частое злокачественное онкологическое заболевание среди молодых женщин.

Проведение количественной ПЦР позволяет установить, прогрессирует или регрессирует патологический процесс. Если количество вирусов увеличивается, это говорит о высоком риске дисплазии шейки матки. А она в дальнейшем переходит в рак.

При длительно сохраняющиеся высокой вирусной нагрузке показано лечение с помощью иммуномодуляторов и противовирусных препаратов общего действия. В процессе лечения проводятся повторные исследования ПЦР.

Врач смотрит, стало вирусов в организме больше или меньше. Если их стало меньше, это хороший прогностический признак. Если же вирусов стало больше, то по результатам количественной ПЦР схему терапии стоит пересмотреть.

Количественное определение РНК ВИЧ и необходимость для лечения

Количественная ПЦР имеет важнейшее значение в диагностике и терапии ВИЧ.

В основном первичная диагностика заболевания проводится путем определения уровня антител в крови. Это метод намного дешевле, а результаты можно получить быстрее.

Но в некоторых случаях без ПЦР не обойтись. Метод позволяет обнаружить ДНК провируса или РНК вируса в крови.

В основном используют количественную ПЦР для выявления РНК. Это самый ранний маркер ВИЧ.  Анализ крови позволит диагностировать болезнь уже через несколько недель после заражения. А количественная оценка методом ПЦР имеет огромное значение в определении схемы терапии.

С помощью анализа оценивают эффективность лечения. Если вирусная нагрузка снижается до неопределяемой, это говорит о том, что терапия проходит успешно.

Антиретровирусные препараты работают. Но если она начинает возрастать, это свидетельствует о формировании резистентности к препаратам. Подобное нередко происходит через несколько лет после начала лечения.

В таком случае схему лечения приходится менять. Иначе количество иммунных клеток в крови начнет снижаться. Вследствие ухудшения иммунитета начнут присоединяться инфекции и возникать злокачественные новообразования.

Используется также выявление ДНК ВИЧ при помощи ПЦР. Метод более предпочтителен для обследования новорожденных детей. Потому что количество РНК в крови может уменьшаться, если мать получала антиретровирусную терапию. В результате в первые дни жизни ПЦР количественная на РНК вируса может быть ложноотрицательной.

Оценка результативности лечения с помощью ПЦР анализа крови к гепатитам

Количественный анализ ПЦР используется при гепатите C для определения уровня виремии.

Метод дает возможность подобрать оптимальную схему терапии. А также он дает возможность оценить, насколько эффективной является проводимая терапия.

Благодаря ПЦР вирус гепатита С определяется уже через 1 неделю с момента заражения. В дальнейшем метод применяется, чтобы понять, было ли специфическое лечение эффективным.

Результаты оцениваются по ряду критериев:

  • вирусологический;
  • биохимический;
  • морфологический.

Вирусологический контроль проводится при помощи ПЦР. Если РНК вируса гепатита С не выявляется, то терапия прошла успешно.

Если результаты остаются отрицательными в течение 6 месяцев, такой вирусологический ответ считается устойчивым.

Появление РНК вируса на фоне прекращения лечения говорит о рецидиве заболевания. В процессе проведения терапии с помощью количественного ПЦР оценивают динамику изменения концентрации вируса.

Оптимальным результатом считается исчезновение РНК в течение не более чем 4 недель противовирусного лечения. Такой вирусологический ответ называют ранним.

ПЦР также позволяет определить тип вируса гепатита. При разных типах назначаются разные схемы лечения. Количественные показатели при вирусном гепатите С оценивают через каждые 3 месяца терапии.

Интерпретация количественной ПЦР мазков и крови

Интерпретацией результатов занимается врач.

Единицей измерения количества патогенных микроорганизмов является концентрация ДНК или РНК в одном миллилитре клинического материала. Она обычно обозначается в 10, которая возведена в степень. Эта степень фактически означает количество нулей, которые следуют после единицы. Например, 104 – это 10 000 копий ДНК.

Для разных инфекций нормы отличаются. В каждом случае требуется индивидуальная расшифровка анализа, так как часто их ещё нужно сравнивать с проведенными ранее исследованиями.

Подготовка к количественному анализу ПЦР мазков и крови

Подготовки к сдаче крови не требуется.

А вот к сдаче мазка нужно приготовиться. Есть несколько ограничений, которых следует придерживаться.

Запрещено накануне сдачи анализа:

  • вести интимную жизнь – в течение 2 дней;
  • принимать антибактериальные препараты (за исключением случаев, когда они назначены врачом) – в течение 2 недель;
  • не мочиться – 3 часа;
  • женщинам – не спринцеваться и не пользоваться тампонами – 2 дня.

К какому врачу обратиться для пцр анализа

Чтобы сделать качественную ПЦР, обратитесь к доктору-венерологу. Специалисты данного профиля ведут прием в нашем медицинском центре. Они оценят, есть ли у вас показания к назначению данного анализа.

При необходимости вы сможете сдать кровь или мазки в день обращения. Результаты для большинства исследований получите на следующий день.

Для сдачи анализов методом ПЦРобращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник: https://onvenerolog.ru/zppp/pcr-kolichestvennyj.html

О здоровье
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: